WEKO3
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頸動脈スキンド平滑筋に対するプロテインフォスファターゼ2A阻害薬の収縮抑制効果
http://hdl.handle.net/10748/00010301
http://hdl.handle.net/10748/00010301ebb72d2d-4d56-4e19-8357-ff17e2b16b09
名前 / ファイル | ライセンス | アクション |
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T01535-001.pdf (2.1 MB)
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Item type | 学位論文 / Thesis or Dissertation(1) | |||||
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公開日 | 2018-10-23 | |||||
タイトル | ||||||
タイトル | 頸動脈スキンド平滑筋に対するプロテインフォスファターゼ2A阻害薬の収縮抑制効果 | |||||
言語 | ||||||
言語 | jpn | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | 血管平滑筋 | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | プロテインフォスファターゼ2A | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
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主題Scheme | Other | |||||
主題 | vascular smooth muscle | |||||
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キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | rubratoxin A | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | Ca^<2+>sensitivity | |||||
キーワード | ||||||
主題Scheme | Other | |||||
主題 | actin-myosin interaction | |||||
資源タイプ | ||||||
資源タイプ識別子 | http://purl.org/coar/resource_type/c_46ec | |||||
資源タイプ | thesis | |||||
著者 |
楢木, 康之
× 楢木, 康之 |
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著者(ヨミ) |
ナラキ, ヤスユキ
× ナラキ, ヤスユキ |
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抄録 | ||||||
内容記述タイプ | Abstract | |||||
内容記述 | 【背景】血管平滑筋収縮はミオシン調節軽鎖(MLC)のリン酸化レベルによって主に制御され,MLCリン酸化レベルはミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)とミオシン軽鎖フォスファターゼ(MLCP)活性のバランスにより決定される.MLCPはプロテインフォスファターゼ1であり,多くの細胞内シグナル伝達経路により活性レベルが調整されることが明らかになっている.一方,プロテインフォスファターゼ2A(PP2A)も主要なセリン・スレオニンフォスファターゼであり血管平滑筋に存在しているが,その細胞内における役割はまだ十分に明らかになっていない.そこで,本研究では特異的PP2A阻害剤であるrubratoxin Aを使用して,血管平滑筋収縮におけるPP2Aの収縮タンパク質に対する作用について検討した.【方法】モルモットの頸動脈を600μMβ-escinを使用して細胞膜を破壊したスキンド標本を作製した.作成した標本をCa^<2+>とカルモジュリンを使用して2回収縮させ,各回の収縮張力を比較した.具体的には,1回目は10^<-5.0>M Ca^<2+>による収縮を,2回目は様々なCa^<2+>濃度にてrubratoxin Aを添加させて収縮させ,1回目の収縮張力と比較することでCa^<2+>やrubratoxin Aの収縮への影響を算出した.また,各rubratoxin A添加時の収縮張カ-Ca^<2+>濃度関係をHill式によって回帰して,MLCリン酸化調節機能の指標とされる平滑筋収縮のCa^<2+>感受性に対するrubratoxin Aの効果を検討した.【結果】1μM,10μMのrubratoxin Aは頸動脈スキンド平滑筋収縮をいずれのCa^<2+>濃度でも有意に抑制し,その効果は濃度依存性の傾向があった.1μM以上のrubratoxin Aは頸動脈スキンド平滑筋の最大収縮張力も抑制した.また,Ca^<2+>濃度低下により収縮抑制効果は増強され,rubratoxin A濃度上昇に伴い平滑筋収縮のCa^<2+>感受性が低下した.【結語】rubratoxin AによるPP2A抑制は頸動脈スキンド平滑筋収縮のCa^<2+>感受性を低下させることからミオシンリン酸化調節に影響を与えることが示唆された.また,最大収縮張力も抑制されたことからrubratoxin AによるPP2A抑制は頸動脈平滑筋のアクチン・ミオシン相互作用も直接抑制する可能性が示唆された. | |||||
抄録 | ||||||
内容記述タイプ | Abstract | |||||
内容記述 | [Background] Contractility of the vascular smooth muscle is essentially regulated with the phosphorylation level of myosin regulatory light chain (MLC). Balance of activity of the myosin light chain kinase (MLCK) and myosin light chain phosphatase (MLCP) determines the MLC phosphorylation level. MLCP is a protein phosphatase 1, and many intracellular signal transduction mechanisms regulate the MLCP activity. Although protein phosphatase 2A (PP2A), another serine/threonine phosphatase, is abundant in the vascular smooth muscle cells, its role in the cell is still unclear. Using rubratoxin A (RTXA), a specific inhibitor of PP2A, the present study aimed to clarify the regulatory mechanisms of PP2A on vascular smooth muscle contractility. [Methods] The cell membranes of carotid arteries of guinea pigs were permeabilized by 600μM β-escin treatment. The preparations were contracted twice with Ca^<2+> and calmodulin. RTXA was added during second contraction. The contractile force of the second contraction was normalized as relative a value to that of the first contraction. To analyze the Ca^<2+> sensitivity, an indicator of the MLC phosphorylation regulation, the relation between the relative force and Ca^<2+> concentration at each RTXA dose was fitted to a Hill equation using the Levenberg-Marquardt algorism. [Results] 1μM, 10μM RTXA significantly inhibited skinned carotid artery contraction at any Ca^<2+> concentration. The inhibitory effects were dependent on the RTXA concentration. The force inhibiting effect of RTXA was stronger at lower Ca^<2+> concentrations, indicating that the agent decreased Ca^<2+> sensitivity for the force. RTXA also suppressed the maximal Ca^<2+> induced contractile force. [Conclusion] The present study shows RTXA decreased Ca^<2+> sensitivity for the force and suppressed the maximal Ca^<2+> induced contractile force, indicating that PP2A inhibition causes both the downregulation of the myosin phosphorylation and direct interference with myosin-actin interaction. | |||||
内容記述 | ||||||
内容記述タイプ | Other | |||||
内容記述 | 首都大学東京, 2018-03-25, 修士(健康科学) | |||||
書誌情報 | p. 1-12, 発行日 2018-03-25 | |||||
著者版フラグ | ||||||
出版タイプ | AM | |||||
出版タイプResource | http://purl.org/coar/version/c_ab4af688f83e57aa | |||||
学位名 | ||||||
学位名 | 修士(健康科学) | |||||
学位授与機関 | ||||||
学位授与機関名 | 首都大学東京 | |||||
学位授与年月日 | ||||||
学位授与年月日 | 2018-03-25 |